外科手术治疗的成败和手术中的无菌操作有着密切关系。参加手术的人员在手术过程中，必须严格遵守无菌操作规程，否则已
建立的无菌环境、已灭菌的无菌物品，仍有受到污染和引起伤口感染的可能，有时可因此而使手术失败，甚至危及病人生命。手术台上的无菌原则，是整个手术的无
菌术，术中如有违反无菌原则者，必须立即纠正。在整个手术进程中，必须按以下规则进行：
1．严格区分无菌区和非无菌区。穿手术衣戴手套后，脐平面以上，乳腺平面以下，两侧腋前线至胸前区为无菌区；背部，腰以下和肩以上都应视为非无菌区，不能接触。
2．在手术过程中只允许在无菌区操作，接触非无菌区即认为被污染。 不可在手术人员背后传递器械及手术用品，手术人员也不可伸手自取。坠落到手术台平面以下的器械物品均视为有菌。如器械越过有菌区，应重新灭菌。
3．手术切口前，戴灭菌手套的手，不要随意触摸病人消毒水平的皮肤，触时应垫有灭菌纱布，用完丢掉。切口边缘要以干纱布垫或无菌巾覆盖，并用巾钳或缝线
固定于皮下，切开皮肤所用的刀、镊，不能再用于深部应更换。(如术前皮肤加贴无菌薄膜者能达到相同的目的可例外)。
4．术中同侧手术人员如需调换位置，一人应先退后一步，转过身背对背地进行交换，以防触及对方背部有菌区。但绕过器械台时，应面对器械台以减少污染。
5．无菌单因水、脓、血等浸透，已失去无菌隔离作用，应加盖无菌单覆盖。衣袖被浸湿或污染时应更换手术衣或加戴无菌袖套。手套破损或被污染，应立即更换。
6．切开空腔脏器(阑尾、子宫、胃肠、胆道)前，应以纱布保护好周围组织，被污染的器械、纱布应另放一弯盘内，以防止或减少污染。相关部分操作完毕后，所用器械不能再用于处理其它组织。
7．如因故手术需要暂停进行时（如等待病理冰冻切片报告），切口应用无菌巾覆盖。术中进行X线拍片、造影或病人躁动时，应注意保护无菌区不被污染。
8．术中保持安静，不可闲谈与大声喧哗。必要的谈话或偶有咳嗽时，不要对向手术区，以防飞沫污染。口罩潮湿后要更换，出汗较多时，应将头偏向于一侧，由其它人代为擦去，以免汗液落于手术区内。
9．两台手术同时进行，如手术已开始，则不应互相拿用器械、用品。
10．手术进行中，如需增加器械、物品，应由巡回士用灭菌钳夹持，传送时手不能靠近器械台。
11．手术开始前要清点器械、敷料，手术结束时，检查胸、腹等体腔，待核对器械、敷料数无误后，才能关闭切口，以免异物遗留体腔内，产生严重后果。
12．切开皮肤及缝合皮肤前应用70％酒精涂擦消毒皮肤一次。缝合皮肤后再用70％酒精涂擦一遍，最后覆盖无菌敷料。
13．参观人员离无菌区不可太近(应保持20厘米以外的距离)，也不可站得过高，尽量减少在室内走动和说话，以减少污染机会。有条件的医院应设专门的隔离看台，或采用网络电视教学。
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